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CBA原理詳細介紹

Cytometric Bead Array(CBA),即細胞因子微球檢測技術。是一種基於流式細胞檢測係統的多重蛋白定量檢測方法,它能夠同時對單個樣品中的多個指標進行檢測。BD利用流式細胞儀可對熒光信號進行級數放大的特性,將受檢的可溶性因子附著於一些具有近似細胞直徑的微粒上,即可對受檢樣品中的各種可溶性因子進行檢測。 CBA的基本原理近似於ELISA的檢測,即利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物,並利用流式細胞儀檢測類似“三明治”的顆粒——待測物複合體所散發的熒光,從而測定待測物的數量。


詳細原理介紹

每個CBA微球大小一致,具有特定的熒光強度,包被有適用於特定分析(如其它抗體或者可溶性蛋白)的特異性捕獲抗體(Capture Antibody),提供了類似ELISA孔板的捕獲表麵。當微球和待測樣品溶液混合後,微球上的特異性抗體就與樣品(血清、血漿或者細胞培養液)中相應的抗原或蛋白結合,然後加入熒光標記的檢測抗體,就會形成“三明治”夾心複合物。最後通過流式細胞儀對特異性目的蛋白進行檢測。CBA的每種微球攜帶有不同強度的紅色熒光,在流式細胞儀的FL3通道通過檢測微球熒光強度的差異對目的蛋白定性;檢測抗體帶有PE熒光素標記,在流式細胞儀的FL2通道檢測,通過檢測抗體的PE熒光強度定量目的蛋白。

CBA技術特點

CBA具有FCM的寬範圍熒光檢測特點,對樣本需求量更少,檢測更快速、更準確。下麵介紹一下CBA主要的技術特點:

  • ◇ 輕鬆實現多重檢測。最多可同時對一個樣本中的75個目的蛋白進行精確定量。
  • ◇ 樣本需要量小。僅需要50μL溶液就可進行一次檢測。
  • ◇ 更高的靈敏度。分析靈敏度高達2.8pg/mL。
  • ◇ 更高的靈敏度、更寬的檢測範圍和更好的重複性。CBA技術使蛋白定量的分析靈敏度高達pg/ml級別,檢測範圍達0-5000pg/ml,所有分析隻需一組標準曲線。根據抗體的熒光強度對目的蛋白定量,排除了ELISA反應中酶聯放大產生的假陽性。
  • ◇ 檢測對象的靈活組合—BD CBA Flex Set。CBA kit是同時檢測試劑盒配好的6個指標,形式比較固定。為滿足不同客戶的實際需要和研究興趣,BD於2005年初推出了CBA Flex set。它改變了CBAkit的固定形式,成為自由組合、靈活搭配的“自助餐”。您可以根據需要組合不同的捕獲微球來檢測多個指標,最多能同時檢測75個指標。除了擁有CBA kit的優勢外,Flex Set還配有獨立的軟件分析係統(CBA Flex Set Analysis Software),並且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上,直接用96孔和384孔板進行操作。CBA Flex set賦予研究者更靈活、更自由,更大的選擇空間,而且進一步豐富了CBA產品線。種類涉及免疫、細胞信號傳導、細胞凋亡等許多領域的蛋白定量分析。
  • ◇ 操作簡單,省時省力。CBA技術采用芯片式集成測定,所有檢測隻需一組標準曲線,就可計算出每種待測蛋白濃度;操作簡單,整個流程隻需要3.5小時,對待測樣本可做實時分析,縮短檢測了時間,提高了檢測效率。
  • ◇ 強大的軟件分析係統。BD CBA軟件具有強大的數據處理能力,直接將目標蛋白的檢測結果換算成標準濃度;除了為用戶提供待測物的計數結果外,還能提供可視輪廓或信號圖形以幫助用戶獲得更多的信息。有用於Macintosh和Microsoft係統兩種版本供您選擇。和傳統的液相蛋白定量技術相比,CBA技術是一種“多元”和“同步”的檢測技術。

革新的CBA技術與傳統的蛋白定量相比有下列優點:


流式CBA檢測技術

檢測指標

一個樣本同時做到多參數檢測

所需樣本量

樣本用量少於50ul

平台

流式儀器,幾乎適用於所有流式儀器,操作方便,節省時間

實驗時間

不需要孵育過夜,流式細胞儀自動檢測,標準曲線自動測定,專用軟件自動計算

背景幹擾

無酶-底物背景幹擾

CBA檢測對象

血清、血漿、眼淚、房水、唾液、體腔灌洗液、細胞培養液上清、細胞裂解物等

CBA應用領域

Luminex Immunoglobulin Isotyping Assays能夠同時定量多至6種免疫球蛋白亞型。可以在細胞培養上清液、血清或血漿樣品中根據kappa鏈、lambda鏈對免疫球蛋白亞型定量,以及總的定量。

  • 炎症因子的水平的分析
  • 腫瘤研究及腫瘤疾病的輔助診斷、療效和預後監測
  • 凋亡相關蛋白分析
  • 係統性紅斑狼瘡(SLE)和新生兒膿血症等免疫疾病的監控
  • 幹細胞研究和幹細胞治療監測
  • 免疫學研究和免疫疾病的輔助診斷和監控
  • 炎症因子的水平的分析
  • 感染疾病的研究及輔助診斷和療效評價
  • 免疫功能監測
  • 藥效評價,藥物研發、疫苗研究
  • 細胞信號傳導中磷酸化蛋白、凋亡相關蛋白定量分析

1、CBA指標

目錄號 產品說明 檢測指標

 557800

 Non-human Primate Th1/Th2 Cytokine Kit

 IL-2, IL-4, IL-5, IL-6,TNF, IFN-γ

 560485

 Mouse Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit

 IL-2, IL-4, IL-6, IFN-γ, TNF, IL-17A, IL-10

 551287

 Mouse Th1/Th2 Cytokine Kit

 IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ,TNF

 552364

 Mouse Inflammation Kit

 IL-6, IL-10, MCP-1, IFN-γ, TNF, IL-12p70

 550026

 Mouse Immunoglobulin Isotyping Kit

 Heavy and light chain isotypes of mouse IgG1,  
 IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM, and IgE

 560484

 Human Th1/Th2/Th17 Kit

 IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-γ, IL-17A

 550749

 Human Th1/Th2 Cytokine Kit

 IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF, IFN-g

 551809

 Human Th1/Th2 Cytokine Kit II

 IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-g

 551811

 Human Inflammatory Cytokine Kit

 IL-8, IL-1β, IL-6, IL-10, TNF, IL-12p70

 552990

 Human Chemokine Kit

 IL-8, RANTES, MIG, MCP-1, IP-10

 561418

 Human Anaphylatoxin Kit

 C3A,C4A,C5A



2、CBA Flex Set 細胞因子檢測指標

 Human Mouse

Rat

 IFN-γ,INF-α
 IL-1 α ,IL-1β,   
 IL-2,IL-3,
 IL-4 , IL-5, IL-6, IL-7,
 IL-8, IL-9, IL-10,   
 IL-11,IL-12, IL-12p70, 
 IL-13,IL-17A, IL-21, 
 IL-23p40
 TNF,TNFRⅠ,TNFRⅡ
 IP-10
 I-TAC
 MIG
 MCP-1
 MIP-1 α, MIP-1 β
 Eotaxin
 RANTES
 CD54(ICAM-1)
 CD62E,CD62P,CD62L
 CD106(VCAM-1)
 sCD40
 sCD154

 sCD121a,sCD121b
 Soluble CD14
 Basic FGF
 VEGF
 Angiogenin
 G-CSF,GM-CSF
 LIF
 LT-α
 OSM
 Granzyme A, 
 Granzyme B
 Fas Ligand(FasL)
 Fractalkine
 IgA, IgG1, IgG2,  
 IgG3,IgG4, IgM, 
  Total IgG,

 IFN- γ
 IL-1 α ,IL-1β, IL-2,IL-3,
 IL-4 , IL-5, IL-6, IL-9,
 IL-10, IL-12, IL-12p70,
 IL-13, IL-17A, IL-21, 
 IL-23p40,
 TNF
 MIG
 MCP-1
 MIP-1 α, MIP-1 β
 RANTES
 KC
 CD62E(E-Selectin),
 CD62L(L-Selectin)
 G-CSF,GM-CSF

 IFN- γ
 IL-1 α, IL-4 , IL-6,
 IL-10
 TNF

3、CBA Flex Set 信號轉導指標

 Phospho Akt1(S473)

 Phospho Akt2(S474)

 Phospho BLNK (Y84)

 Phospho p120 Catenin(Y228)

 Phospho Btk (Y551)

 Phospho MEK1/2(S222)

 Phospho eNOS (S1177)

 Phospho Paxillin(Y118)

 Phospho ERK1/2 (T202/Y204)

 Phospho Pyk2(Y402)

 Phospho Itk (Y511)

 Phospho SLP-76(Y145)

 Phospho JNK1/2 (T183/Y185)

 Phospho c-jun(S63)

 Phospho p38 (T180/Y182)

 Phospho stat3

 Phospho PLCg (Y783)

 Total Stat1

 Phospho Rsk (T573)

 Total Syk

 Phospho Stat1 (Y701)

 Total ZAP70

 Phospho Syk (Y352)

 Phospho ZAP70 (Y319)



4、CBA Flex Set 幹細胞指標

 Human Rex-1 Flex Set

 Human Nanog Flex Set

 Human Oct-4 Flex Set

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